[Western blotting] 웨스턴 블로팅

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Western blot (웨스턴 블롯)

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: 웨스턴 블롯은 특정 샘플 내에서 단백질 유무 또는 양을 확인하기 위한 분석 방법

: 웨스턴 블롯은 단백질-단백질 사이의 상호작용에 기반

→ 서던 블롯: DNA-DNA

→ 노던 블롯: DNA-RNA

: 주로 항원-항체(Antigen-Antibody) 반응을 사용하기에 매우 높이 특이성을 가짐

→ 항원-항체 반응으로 타겟하는 특정 단백질을 검출

Western blot 실험 과정

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1. 세포들을 파쇄한 후, 추출한 단백질을 SDS-PAGE 수행

*SDS-PAGE(Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis): 단백질 질량 차이에 따른 분리 방법

2. 단백질을 겔에서 멤브레인 막으로 옮김

3. 블로킹 과정을 통해 코팅을 해주어, 불필요한 것들을 붙지 않게함

4. 1차 항체반응

*1차 항체는 찾고자 하는 단백질에 특이적으로 붙도록 디자인

5. 결합하지 않은 항체들을 씻어냄

6. 2차 항체반응

*2차 항체는 눈으로 확인하기 위해 사용됨

*2차 항체는 신호를 증폭시키는 효과 존재

7. 결합하지 않은 항체들을 씻어냄

8. 발색 반응을 일으켜서 밴드를 감별함

# 웨스턴 블로팅 실험 영상

#Reference

1) https://ko.wikipedia.org/wiki/%EC%9B%A8%EC%8A%A4%ED%84%B4_%EB%B8%94%EB%9E%8F

2) http://www.dynebio.co.kr/yc/bbs/board.php?bo_table=data1&wr_id=14&sst=wr_hit&sod=desc&sop=and&page=1

3) https://www.novusbio.com/application/western-blotting

4) https://www.youtube.com/watch?v=GJJGNOdhP8w

[Western blotting] 웨스턴 블로팅 End

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