[Southern blotting] 서던 블로팅

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Southern blot (서던 블롯)

: 겔 전기영동으로 분획된 DNA 단편을 membrane에 옮긴 후, 특정 염기서열을 지닌 단편을 검출하는 기술

: 서던(E. Southern)에 의해 개발 (1975)

: 분자 생물학에서 DNA 시료의 특정 DNA 서열을 찾기위한 방법

: 샘플에서 특정 DNA 서열의 존재 여부, DNA 양, 절편 크기 등을 확인 가능

Southern blot 실험 과정

1. 세포들에서 DNA 분리

2. 추출된 DNA를 제한효소로 절단

3. 아가로스(Agarose) 겔에 전기영동 한 후, DNA 조각을 크기별로 분리

4. DNA를 알칼리로 단일 가닥 상태로 만듦

*DNA 길이가 짧을수록 NC필터로 전이 잘됨

5. 모세관 현상으로 겔에서 NC(Nitrocellulose) 필터로 DNA 전이

6. NC 필터에 자외선을 쪼여 핵산과 NC 필터 사이에 교차 결합을 형성

7. 탐지하고자 하는 DNA와 상보적인 DNA 탐침(probe) 제조

*probe: 방사선동위원소나 효소, 혹은 발광 및 발색 반응할 수 있는 핵산조각

8. 여과지와 탐침을 충분한 시간동안 혼성화 진행

*관심있는 DNA절편과 탐침이 다시 이중나선을 형성

*혼성화(hybridization): 염색체에 탐침 DNA를 부착시키는 과정

9. X선 필름에 여과지를 감광시켜 특정 DNA 존재 확인

#서던 블로팅 실험 영상

#Reference

1) https://ko.wikipedia.org/wiki/%EC%84%9C%EB%8D%98_%EB%B8%94%EB%9E%8F

2) https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=380135&cid=50328&categoryId=50328

3) https://bio.libretexts.org/Bookshelves/Genetics/Book%3A_Online_Open_Genetics_(Nickle_and_Barrette-Ng)/08%3A_Techniques_of_Molecular_Genetics/8.6%3A__DNA_Analysis%3A_Blotting_and_Hybridization

4) https://www.youtube.com/watch?v=GPVf_AWMYZ4

[Southern blotting] 서던 블로팅 End

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