[Northern blotting] 노던 블로팅

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Northern blot (노던 블롯)

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: 겔 전기영동으로 분획된 RNA 단편을 membrane에 옮긴 후, 특정 염기서열을 지닌 단편을 검출하는 기술

: 노던 블롯은 서던 블롯과 유사한 이름으로 명명(1977) 

→ 이름이 의미하는 동서남북 방향과 관계 없음

→ 서던 블롯을 응용해 특정 mRNA 발현 정도를 찾아내는 방법이었기에 유사하게 명명

: 분자 생물학에서 시료의 특정 RNA(mRNA) 동정으로 유전자 발현을 연구하는 방법

: 샘플에서 특정 mRNA 서열의 존재 여부, 양, 절편 크기 등을 확인 가능

Northern blot 실험 과정

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1. 세포들에서 RNA 분리

2. RNA를 변성시켜 단일가닥으로 유지하기 위해 포름알데히드(formaldehyde) 처리

3. 탐침과 RNA가 결합 온도를 낮추기 위해 포름아미드(formamide) 처리

*탐침과 RNA가 결합할 때 온도가 높으면 불안정한 RNA는 쉽게 분해

4. 추출한 RNA를 아가로스(Agarose) 겔에 전기영동 한 후, RNA 조각을 크기 별로 분리

5. 모세관 현상으로 겔에서 NC(Nitrocellulose) 필터로 RNA 전이

6. NC 필터에 자외선을 쪼여 핵산과 NC 필터 사이에 교차 결합을 형성

7. 탐지하고자 하는 RNA와 상보적인 단일나선 DNA or RNA 탐침(probe) 제조

*probe: 방사선동위원소나 효소, 혹은 발광 및 발색 반응할 수 있는 핵산조각

8. 여과지와 탐침을 충분한 시간동안 혼성화 진행

*탐침은 자신과 상보적인 염기서열을 가진 RNA에 결합

*혼성화(hybridization): 염색체에 탐침 DNA를 부착시키는 과정

9. X선 필름에 여과지를 감광시켜 특정 RNA 존재 확인

# 노던 블로팅 실험 영상

#Reference

1) https://www.researchgate.net/figure/General-schematic-of-Northern-blotting_fig1_318305214

2) https://ko.wikipedia.org/wiki/%EB%85%B8%EB%8D%98_%EB%B8%94%EB%9E%8F

3) https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5569294&cid=61233&categoryId=61233

4) https://www.youtube.com/watch?v=zfvihIzYyAc

[Northern blotting] 노던 블로팅 End

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