[Gene cloning] 유전자클로닝 Start
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1. 유전자클로닝 (DNA클로닝;유전자재조합기술)
: 관심 있는 유전자 절편을 벡터에 삽입 후, 세포에 주입하여 발현시키는 유전자재조합 기술 (Recombinant DNA technology)
: 쉽게 말해, 타겟하는 유전자의 동일한 사본을 세포 내에 보관하고 증폭하는 기술
: 형질전환된 생물에서 특정 유전자를 발현시켜 유용한 물질을 대량 생산할 수 있음
→ 인간 인슐린 유전자를 E. coli 박테리아에서 발현시켜 당뇨병 환자를 위한 인슐린 대량 생산
2. 유전자클로닝 준비
ㄱ) 제한효소 (Restriction enzyme)
ㄴ) DNA연결효소 (DNA Ligase)
ㄷ) 운반체 (Vector)
3. 유전자클로닝 과정
1) 유전자를 자르고 이어붙이기
- 관심 있는 유전자 서열을 PCR로 증폭함
- 제한효소를 통해, 벡터 플라스미드의 Multicloning site 확보
- DNA연결효소를 통해, 플라스미드와 타겟유전자 서열 연결
2) 박테리아 형질전환 및 선별
- 절편이 연결된 벡터 플라스미드를 박테리아에 주입 (형질전환)
*열충격(Heat shock), 전기천공법(Electroporation)
- 항생제가 놓인 고체배지에 박테리아를 뿌려서 플라스미드를 지닌 균주만 선택 (콜로니 선별)
3) 단백질(결과물) 대량 생산
- 플라스미드를 지닌 콜로니를 계속해서 성장시킴
- 성장한 박테리아는 주입된 유전자를 과발현하여 단백질 생산
*Gene → mRNA → Protein
[Gene cloning] 유전자클로닝 End
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