[ELISA] 효소결합면역흡착검사

[ELISA] 효소결합면역흡착검사 Start

BioinformaticsAndMe

0. ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay)?

---

: 효소결합면역흡착검사(ELISA)는 항체/항원에 효소를 표지 후, 효소 활성 측정으로 항원-항체 반응 정도를 측정하는 방법

1) Direct ELISA

2) Indirect ELISA

3) Sandwich ELISA

4) Competitive ELISA

1. 직접(Direct) ELISA

---

: 항원과 반응하는 항체(1차 항체)에 바로 효소를 결합하는 방법

ㄱ) 타겟 항원을 튜브 바닥에 고정함

ㄴ) 효소가 부착된 항체를 투여해서 튜브 바닥의 항원과 붙게 함

ㄷ) 결합하지 않은 항체를 씻어냄

ㄹ) 기질(Substrate)을 첨가해, 효소 발색 반응으로 항원 양을 측정함

▶장점 - 최소한의 과정으로 실험 진행

▶단점 - 모든 1차 항체를 표지하므로 비용이 높음

2. 간접(Indirect) ELISA

---

: 항원과 결합하는 항체(1차 항체) 대신, 그 항체와 결합하는 항체(2차 항체)에 효소를 결합하는 방법

ㄱ) 타겟 항원을 튜브 바닥에 고정함

ㄴ) 1차 항체를 투여해 항원과 붙게 함

ㄷ) 결합하지 않은 항체를 씻어냄

ㄹ) 효소가 부착된 2차 항체를 투여해, 1차 항체 Fc region에 붙게 함

ㅁ) 기질(Substrate)을 첨가해, 효소 발색 반응으로 특정 항원에 대한 항체를 정량 확인

▶장점 - 2차 항체로 신호 증폭 가능

▶단점 - 교차 반응성 존재

3. 샌드위치(Sandwich) ELISA

---

: 항원에 대한 항체를 바닥에 먼저 결합 후, 그 항체에 대한 항원을 결합하는 방법

ㄱ) 포획 항체를 튜브 바닥에 고정함

ㄴ) 고정된 포획 항체 위에 항원을 투여해 붙게 함

ㄷ) 결합하지 않은 항원을 씻어냄

ㄹ) 효소 부착된 검출 항체를 위에 뿌려 항원에 붙게 함

ㅁ) 기질(Substrate)을 첨가해, 효소 발색 반응으로 포획 항체에 붙은 항원 정량 확인

▶장점 - 높은 민감도와 특이성

▶단점 - 항원은 최소 2개 이상의 항체 결합 위치가 존재해야 함

4. 경쟁적(Competitive) ELISA

---

: 항체 결합 부위가 같은 서로 다른 항원 사이를 경쟁시키는 방법

ㄱ) 포획 항체를 튜브 바닥에 고정함

ㄴ) 타겟 항원 및 효소 결합된 타겟 항원을 튜브에 투여함

ㄷ) 타겟 항원 비율에 따라 효소 발색 반응에 차이가 발생

- 타겟 항원 비율 낮을수록, 기질 발색 반응 증가

- 타겟 항원 비율 높을수록, 기질 발색 반응 감소

▶장점 - 높은 재현성

▶단점 - 낮는 민감도와 특이성

# ELISA(엘라이사) 실험 과정

#Reference

1) https://ruo.mbl.co.jp/bio/e/support/method/elisa.html

2) http://www.abnova.com/support/resources.asp?switchfunctionid={70196CA1-59B1-40D0-8394-19F533EB108F}

3) https://ko.wikipedia.org/wiki/%ED%9A%A8%EC%86%8C_%EA%B2%B0%ED%95%A9_%EB%A9%B4%EC%97%AD_%EC%B9%A8%EA%B0%95_%EB%B6%84%EC%84%9D%EB%B2%95

4) https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/protein-biology/protein-biology-learning-center/protein-biology-resource-library/pierce-protein-methods/overview-elisa/elisa-development-optimization.html

[ELISA] 효소결합면역흡착검사 End

BioinformaticsAndMe